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改善液相色谱基线噪音的方法(下)

* 来源: * 作者: admin * 发表时间: 2019-05-08 13:45:37 * 浏览: 8
    前面三点讲的都是内在原因造成的基线噪音或者波动。如果你前面的原因都找过了,问题还没有解决,就得考虑一下是不是流动相里面有杂质了。

四、系统洁净程度
如何检查判断是否是流动相问题?
a. 每次更换一种流动相,看基线结果。
b. 重新配置所有流动相。这种方式比较快,但可能无法找到根本原因。
    要特别注意在流动相的配置过程中,是否引入了污染,比如使用了不干净的玻璃器皿什么的。
c. 更换溶剂的品牌和批次也是方法之一。
色谱柱长期使用造成的污染有时候也会造成基线波动。
    有些时候样品里面可能有些保留非常强的组分,可能在色谱柱上很长时间才慢慢被冲出来,这时候已经不是一个峰了,而是基线的干扰或者波动了。
    避免这种问题的方法:在每次做样后,用甲醇或者乙腈长时间冲洗色谱柱。另外,专柱专用也是一个好的习惯。如果一根色谱柱上做很多不同的样品,也可能导致互相之间的污染和影响。
 
五、电路的噪音
对于UV检测器来说,就是采样频率不合适而产生的噪音。
    现在随着超高效液相的普及,检测器的采样频率也越来越高,有的可以达到80Hz以上。但是如果一味追求高采样频率,可能对灵敏度没有任何帮助,反倒产生比较大的噪音。
一般来说,我们需要保证一个色谱峰上面有15-20个点,来保证比较平滑的峰形和比较准确的定量结果。
如果我的一个峰的时间宽度是0.5min,就是是30s,那只要保证1Hz的采样频率就足够了。
如果在UPLC上面,一个峰的时间宽度是0.05min,也就是3s,就需要10Hz以上的采样频率。
那80Hz的采样频率什么时候用呢?你的一个峰只有0.5s的时候用。
理论上的计算是这样的:N=16(T/W)^2
N是柱效;T是保留时间;W是峰宽。
一般色谱如果柱效12000的塔板数,在5min的时候,出峰宽度大概计算出来是11s。
你可以根据计算结果来调整检测器合适的采样频率。
 
    上面从理论到实践,从各个方面分析了液相色谱基线噪音或者波动的来源,以及相应排除问题的方法,希望可以帮助到你。